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O propósito deste estudo foi detectar serológica (exame de micro aglutinação) e molecular (o ADN de <em>Leptospira spp.</em> por PCR convencional-reação da polimerase em cadeia) a exposição ou presença de Leptospira spp., a partir de amostras de soro sanguíneo, líquido pré-ejaculatório e sêmen em cavalos reprodutores nativos colombianos representativos desta raça, em 44 criadouros do estado de Cundinamarca. Na Colômbia não existem estudos relacionados com a presença de leptospira em sêmen equino, e dentro dos planos sanitários nesta espécie não se vacina contra esta doença. Foram avaliadas amostras de um total de 107 animais, escolhidos por amostragem por conveniência, das quais ao analisar o soro foram soro reativas 35 (32,7 %), correspondentes ao sorogrupo <em>Leptospira interrogans</em>, soro variedades Canícola, Pomona e Grippotyphosa. Foi detectado o DNA de <em>Leptospira spp.</em>, por PCR convencional em duas amostras de sêmen que representaram o 1,9 % do total de amostras. Por meio da técnica de campo escuro na maioria das amostras de líquido pré-ejaculatório foram encontradas diferentes formas bacterianas, algumas destas compatíveis com leptospira. Também se observaram células de descamação, cristais e uratos. Adicionalmente, não se obteve isolamento da bactéria no médio EMJH e não se detectou ADN mediante a técnica de PCR convencional a partir do líquido pré-ejaculatório.
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